細胞介紹

該細胞系來自 8 歲黑人男性的組織。其染色體模式數目為 60，在裸鼠中能致瘤。

該細胞系含有乙型肝炎病毒基因組，需在 2 級生物安全防護下操作。STR 結果如

下：Amelogenin: X；CSF1PO: 8；D13S317: 12,14；D16S539: 10；D5S818: 13；D7S820:

8,10；THO1: 6,7；TPOX: 9；vWA: 17。

細胞特性

1） 來源：肝

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10 6 細胞數

4） 規格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5)

用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL 凍存管包裝干冰運輸，收

到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存

管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25 瓶復蘇的存活

細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養箱放置約 2-3h，若發

現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在 4 或 5X 顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20

×）各 2-3 張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在 37℃培養箱中放置 2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁

情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡

下觀察細胞的生長密度若在 60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁

的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的培養基 6-8mL，

放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達 70%-80%以上，可以對細胞進行

傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說

明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建

議 T25 培養瓶 1：2 傳代 。

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備 MEM 培養基；優質胎牛血清，10%；1%L-谷氨-酰胺, 1%NEAA, 1%丙酮

酸鈉,

雙抗，1%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱

濕度為 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：：

將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含 4-6mL 培養基的離心管中混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含 6-8ml 培養基的培養瓶（或皿）

中 37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋-白酶-0.53 mM EDTA 于培養瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75

瓶 2-3mL），置于 37℃培養箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化

時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿

回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL

培養液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照

說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際

情況按 1:2~1:5 的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續實驗

使用。下面 T25 瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血

球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為 1×10 6~1

×10 7個活細胞/ml.

2. 1000rpm 離心 3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每

1ml 凍存液含 1×10 6~1×10 7 個活細胞/ml 分配到一個凍存管中將細胞分配到

凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80 度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器

中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，

并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍

存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導

致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3. 本產品僅限科研用途。