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詳細介紹
脂蛋白在人體中主要起到運輸脂質(如膽-固醇、脂質、甘油三酯)的作用,按照分子量大小,主要分為以下幾種(從高到低):乳糜(CM)、極低密度脂蛋白 (VLDL)、中間密度脂蛋白 (IDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等。其中HDL是密度最高的脂蛋白,不像其他大分子脂蛋白,主要將脂質運輸到細胞,HDL是將脂質運出細胞,因此,高密度脂蛋白具有清除血管內多余血脂、清除血垢、清潔血管、維持細胞內膽-固醇量的相對衡定的作用,從而限制動脈粥樣硬化的發生發展,起到抗動脈粥樣硬化作用。本品Human DiI-High Density Lipoprotein為熒光探針DiI標記的高密度脂蛋白,可以用來觀察培養細胞的HDL結合位點,或篩選HDL受體表達缺陷型細胞突變株。也可以通過流式細胞術評估細胞受體水平,或檢測組織內的受體水平。
保存:4℃避光保存,不可以冷凍,保質期6周。
操作流程:
1.無菌條件下,將DiI-HDL用細胞培養基稀釋至10-30 µg/mL。
2.加入活細胞內,37℃培養4-5小時。
3.孵育結束,吸去含有Human DiI-HDL的培養基,并用無探針的培養基洗幾次。
4.根據實驗需求用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
4.1熒光顯微鏡觀察
采用標準的羅丹明激發:發射濾光片(或建議使用波長為:Ex/Em=549 nm/565 nm);若需要請使用含3%甲醛的PBS進行固定,切勿使用甲醇或丙酮固定,因DiI易溶于有機溶劑。注: 需設陽性細胞以做對照。
4.2細胞分選(流式細胞術)
胰-蛋白酶處理細胞或者加入EDTA制成單細胞懸液,選用合適的已標記純化細胞用作陰性和陽性對照,從而進行流式分選設門。(建議使用波長為Ex: 514/549 nm; Em: 565 nm)。
注意事項:
1,本品配制成溶液后不穩定,需要即配即用。
2,為了您的健康,請佩戴一次性手套。
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